1. 贴壁细胞的消化:
a) 吸去培养液,用无菌 PBS 或 D-Hanks 洗涤细胞两遍,以去除残余的血清。
b) 加入少量 Trypsin-EDTA 消化液,以能覆盖细胞为限(如 T25 瓶加入0.5mL胰酶消化液,T75瓶加入 2mL 胰酶消化液),一般细胞 37℃放置 30 秒~3 分钟。不同的细胞消化时间有所不同,对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。
c) 期间在显微镜下观察,一旦发现细胞明显收缩并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化,或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,此时立即加入含血清的细胞培养液终止消化,轻轻吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
d) 如果发现消化不足,可加入 Trypsin-EDTA 消化液重新消化。
e) 如果细胞对于胰酶敏感,或需要去除胰酶,则将中和后的细胞悬液 250g 离心
5 分钟,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2. 组织的消化:不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。