间充质干细胞(MSC, mesenchymal stem cells)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。
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成骨诱导分化步骤
1.成骨诱导分化完全培养基的配制①室温条件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬时离心，使溶液集中于离心管底 部。（注意：若因子或血清中有沉淀物，属正常现象，无须过滤，避免成分丢失。） ②根据实验用量，于无菌操作台中配制诱导分化完全培养基，建议每次配制50mL， 配制比例见下表：
2.成骨诱导分化实验步骤①建议取第3~5代、纯度达90%以上、状态良好的间充质干细胞，将其消化下来，离心 收集，使用间充质干细胞完全培养基调整细胞密度为1~5×105个cell/mL，均匀铺于6 孔板中，每孔2mL，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。（注意：此处细胞密度及培养液 体积以6孔板为例，若为其它培养器皿，请根据实际情况调整细胞密度及培养液体积。） ②待细胞汇合度达80%~100%时，即可进行诱导分化。③小心吸弃细胞培养上清，沿孔壁缓慢加入提前配制好的诱导分化完全培养基，每孔 2mL，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃ 预热。） ③每2day换用新鲜的诱导分化完全培养基。换液时，若细胞培养上清颜色变为澄清的 黄色，是由于细胞量较大，营养消耗较快导致的，请及时调整为每日换液。（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃预热。） ④细胞诱导3周后，即可进行茜素红染色鉴定。 3.茜素红染色分析 1 细胞诱导分化结束后，小心吸弃细胞培养上清，1×PBS润洗1~2次。每孔加入1mL 细胞固定液（4%中性甲醛溶液等），室温固定30 min。2 吸弃细胞固定液，1×PBS润洗2次。沿孔壁缓慢加入茜素红染色液，每孔1mL，室 温染色30min。（注意：染色液底部可能会有沉淀，吸取时尽量不要触及底部。若细胞染色 后有沉淀，1×PBS洗去即可。） 3 吸出染色液，1×PBS润洗，去掉浮色。显微镜下观察细胞染色效果，钙盐呈较深 的橙红色。（注意：染色液可重复使用，建议收集。）
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